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油菜花粉超微粉有效成分溶出、代谢特征及指纹图谱
作者:姚秋萍
油菜花粉是一种丰富的花粉资源,具有提高免疫活性、降血脂、抗肿瘤等生物学功能。目前对油菜花粉的研究侧重于基础和应用研究,而对于其结构与功能深入系统的研究较少。本研究以油菜花粉为实验材料,采用超微粉碎技术使花粉破壁,以普通粉碎方式作为对照,对比了两种粉碎方式对所得的超微粉和细粉中主要营养成分、有效成分的影响及组织形态学上的差异;比较油菜花粉超微粉、细粉中槲皮素和山奈酚在实验动物体内的药代动力学参数;对油菜花粉超微粉多糖进行分级,筛选抗氧化和免疫活性部位,对活性部位多糖进行结构表征;建立油菜花粉超微粉黄酮类成分的HPLC指纹图谱,使这一丰富资源的开发和应用提高到新的水平。主要结果如下:
(1)分析比较了超微粉碎和普通粉碎方式对油菜花粉主要营养成分含量的影响,并比较了扫描电镜下超微粉和细粉形态学上的差异。结果表明:除粗纤维含量降低外,粗蛋白、粗脂肪、灰分、还原糖和总黄酮含量都有不同程度的提高。
在电镜下观察,油菜花粉细粉基本可以看到完整的细胞形态,而超微粉的颗粒变小、大小均匀,绝大多数细胞壁破裂,基本无完整的细胞存在,破壁率为98.86%
(2)分别采用高效液相色谱法、比色法分析比较了油菜花粉超微粉和细粉中黄酮类成分(槲皮素、山奈酚)、不同浸提时间下多糖的溶出差异。结果表明:在相同的提取条件下,油菜花粉超微粉中槲皮素和山奈酚的溶出率比细粉分别提高了45.16%和27.86%;油菜花粉超微粉多糖的溶出量和溶出速度都大于细粉,浸提时间为10 min时多糖的溶出率较细粉提高了252.54%。红外光谱结果显示,油菜花粉超微粉和细粉多糖的主要基团无明显差异。可见,超微粉碎可显著提高油菜花粉有效成分的溶出率。
(3)采用高效液相色谱法测定家兔灌胃给予油菜花粉超微粉和细粉后血浆中槲皮素和山奈酚的浓度,血药浓度-时间数据经药代动力学分析软件(PKS软件)处理,比较油菜花粉超微粉和细粉中槲皮素和山奈酚在家兔体内的药代动力学参数。结果表明:油菜花粉超微粉和细粉中槲皮素和山奈酚的药代动力学最佳模型均为二室开放模型。油菜花粉超微粉槲皮素的主要药动学参数:Ka=0.579 3 h1,t1/2α=2.43 h,t1/2β=18.33 h,AUC0→∞=0.361 3 µg·L1·h,Vd= 804.8 L·kg1,Tpeak=2.571 4 h,Cmax=0.019 08 µg·mL1;油菜花粉细粉槲皮素的主要药动学参数:Ka=1.279 0 h1,t1/2α=2.63 h,t1/2β= 28.00 h,AUC0→∞= 0.341 1 µg·L1·h,Vd = 997.3 L·kg1,Tpeak= 3.048 h,Cmax=0.018 769 µg·mL1。油菜花粉超微粉山奈酚的主要药动学参数:Ka=0.413 6 h1,t1/2α=2.29 h,t1/2β=2.97 h,AUC0→∞= 1.889 7 µg·L1·h,Vd =33.056 L·kg1,Tpeak =3.642 9 h,Cmax=0.280 79 µg·mL1;油菜花粉细粉山奈酚的主要药动学参数:Ka=0.443 62 h1,t1/2α=1.74 h,t1/2β=1.99 h,AUC0→∞=1.459 9 µg·L1·h,Vd=31.418 L·kg1,Tpeak=3.714 3 h,Cmax =0.245 53 µg·mL1。与细粉组比较,油菜花粉超微粉组血浆槲皮素和山奈酚的达峰时间缩短、达峰浓度提高,相对生物利用度较细粉分别提高了46.00%、29.44%。可见,超微粉碎技术可提高油菜花粉有效成分槲皮素和山奈酚的生物利用度。
(4)采用不同截留相对分子质量(100 kD、50 kD和10 kD)的超滤膜对油菜花粉超微粉粗多糖进行分级纯化,分析了压力和时间对超滤过程的影响,确定最适操作条件,3种截留相对分子质量的超滤膜运行时间分别控制在28 min、36 min和48 min以内,操作压力分别为1.1 MPa、1.3 MPa和1.6 MPa。油菜花粉超微粉粗多糖M按相对分子质量分成M1>100 kD、50 kD活性组分。体外清除·OH和的试验结果表明,油菜花粉多糖的
抗氧化活性与其相对分子质量分布密切相关,M3、M4两个级分的抗氧化作用较低,在后续试验中合并作为一个组分M3进行研究。由体内抗氧化、免疫活性试验筛选得到高活性组分M2和低活性组分M3,M2级分多糖比其他组分有较好的抗氧化和免疫活性,各组分的抗氧化和免疫活性大小顺序为M2>M>M1>M3。
(5)M2级分多糖先后经DEAE-SephadexA-25离子交换柱层析和Sephadex G-100凝胶柱层析纯化得到RPP1-2。经高效液相凝胶色谱鉴定其纯度及计算相对分子质量,RPP1-2为单一对称峰,重
均相对分子质量为65 358 Da。离子色谱测定RPP1-2中含量为
2.81%。紫外光谱、红外光谱和核磁共振分析结果表明,RPP1-2为糖蛋白缀合物,为α-糖苷键构型,分子结构中存在α-1,3、α-1,6糖苷键,RPP1-2为由3种不同单糖残基组成的杂多糖,糖链中重复单位包含葡萄糖、甘露糖和半乳糖。
(6)采用高效液相色谱法对不同产地的油菜花粉超微粉的指纹图谱进行比较,应用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件对油菜花粉超微粉黄酮类成分HPLC指纹图谱进行分析评价。以芦丁为内标物,采用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 µm)为分析色谱柱,乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL·min1,检测波长254 nm,柱温25 ℃。结果表明:10批不同产地的油菜花粉超微粉黄酮类成分HPLC指纹图谱较相似,各成分得到较好的分离,并根据检测结果确定了10个共有指纹峰。该方法具有重现性好、特征性强、方法简便、快速等特点,能够客观反映油菜花粉超微粉的指纹特征,可以成为油菜花粉超微粉质量评价及控制的表征指标。
由于作者水平有限,书中难免存在不足之处,敬请读者及同行专家批评指正。
作 者 -
时代脉动:高速铁路发展简史
作者:曲思源
本书为高速铁路科普读物,从技术发展的客观角度,以我国高铁技术发展为核心,向读者整体真实地展现了我国高铁技术发展历史、高速铁路技术、运营组织与管理,并将其放到世界高铁发展视野中比较,分析其他各国高铁技术的发展状况,深度分析我国高铁与其他国家高铁技术的差别,从中比较出我国高铁发展的竞争力、发展前景和短板,为我国高铁的进一步发展献策献力。本书介绍高铁技术知识兼具科学性和可读性,旨在让读者了解我国高速铁路的技术发展历程,强化民族自信与自豪。
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大学网站色彩评价研究的理论与实践
作者:杨斌芳
21世纪是网络建设飞速发展的时期,形形色色的网站犹如雨后春笋般地蜂拥而出,而色彩是各类网站所共有的组成部件,很多网站都是以自身色彩的独特性引起用户注意,正因为色彩的独特性使得网站在用户心目中留下深刻的印象。本研究基于这一目的,在对色彩与人的情感之间的联系纽带——色彩联想与色彩象征考察的基础上,采用色彩学中研究色彩与人的情感之间关系的一种方法——奥斯库德发明的(Semantic Differential Method,SD研究范式)语义差异法,对现有我国大学网站色彩所激发的人的情感效果进行研究。
《大学网站色彩评价研究的理论与实践》不仅为提高大学网站色彩的设计提供参考,而且还为网站色彩评价提供了一套切实可行的评价体系。
图书分类
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